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Novos insights sobre respostas metabólicas induzidas pela ingestão de defensina vegetal na praga de inseto polífaga Helicoverpa armigera

Jul 20, 2023

Scientific Reports volume 13, Artigo número: 3151 (2023) Citar este artigo

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A praga do inseto lepidóptero Helicoverpa armigera é uma das pragas mais destrutivas das plantas cultivadas e diversas abordagens biotecnológicas estão sendo desenvolvidas para seu controle. As defensinas vegetais são pequenos peptídeos catiônicos e ricos em cisteína que desempenham um papel na defesa das plantas. A ingestão de uma defensina de Capsicum annuum (CanDef-20) induziu uma redução dependente da dose na massa larval e pupal, atrasou a metamorfose e também reduziu gravemente a fecundidade e a fertilidade em H. armigera. Para compreender os mecanismos moleculares da antibiose mediada pela ingestão de CanDef-20 em larvas de H. armigera, foi realizada uma análise transcriptômica comparativa. A regulação negativa predominante de GOs representa endopeptidases do tipo serina, constituintes estruturais dos ribossomos e componentes integrais da membrana e regulação positiva diferencial da ligação do ATP, núcleo e tradução, enquanto foi detectada regulação positiva da ligação do ácido nucleico representada por elementos transponíveis. Descobriu-se que diferentes isoformas de lipase, serina endopeptidase, glutationa S-transferase, caderina, fosfatase alcalina e aminopeptidases foram reguladas positivamente como uma resposta compensatória à ingestão de CanDef-20. Ensaios enzimáticos in vitro e análise qPCR de alguns genes representativos associados a processos celulares vitais, como metamorfose, digestão de alimentos e membrana intestinal, indicaram regulações diferenciais adaptativas em larvas de H. armigera alimentadas com CanDef-20. Concluímos que a ingestão de CanDef-20 afeta o metabolismo dos insetos de várias maneiras através de sua interação com a membrana celular, enzimas, proteínas citoplasmáticas e desencadeando a mobilização de transposons que estão ligados ao retardo de crescimento e estratégias adaptativas em H. armigera.

As pragas de insectos levam a perdas substanciais de rendimento nas culturas, quer por danos directos, quer pela propagação de doenças. Do número de pragas de insetos que ameaçam e atacam as plantas cultivadas, Helicoverpa armigera é polífaga e a mais devastadora1. Medidas de controle como o uso de vários pesticidas e abordagens baseadas em culturas transgênicas têm sido usadas globalmente, embora H. armigera desenvolva resistência2, levando ao fracasso desses métodos, necessitando do desenvolvimento de novas abordagens biológicas para o controle de pragas sustentável e favorável ao meio ambiente.

Os insetos polífagos desenvolveram múltiplos mecanismos de resistência, como a produção de glutationa S-transferase, glicose oxidase, superexpressão de protease insensível e mono-oxigenase do citocromo P450 para lidar com as defesas das plantas . Os mecanismos moleculares de resistência dos transgênicos Bt têm sido estudados nos últimos anos. A mutação na caderina e no gene transportador ABCC2 presente no epitélio da borda em escova de H. armigera e H. virescens resultou na resistência à toxina Bt4. Além disso, a expressão alterada de fosfatase alcalina (ALP)5, aminopeptidase N (APN)6 e eventos regulatórios na proteína quinase ativada por mitógeno (MAPK)7 foram os mecanismos de resistência utilizados pelos insetos lepidópteros contra a toxina Bt. Esses estudos fornecem evidências de notável diversidade e plasticidade no metabolismo dos insetos para combater as defesas das plantas.

As plantas desenvolveram redes regulatórias sofisticadas para apresentar respostas de defesa constitutivas e induzidas contra ataques de herbívoros3. A indução das vias do jasmonato (JA) e do ácido salicílico (SA)4 seguida pela produção de metabólitos secundários, inibidores de proteinases (PIs)5 e peptídeos antimicrobianos (AMPs) determinam uma resposta de defesa específica da planta para pragas. O efeito dos AMPs sobre os insetos não está claramente decifrado, e sabe-se que há uma probabilidade muito menor de gerar resistência aos AMPs em bactérias do que aos antibióticos8. Portanto, estudar o mecanismo de contra-defesa do inseto contra moléculas de defesa das plantas, como os peptídeos de defensina, nos ajudará a piramidar as moléculas de defesa para um melhor controle de pragas de insetos9.

 30. Normalized reads were assembled into longer fragments (contigs) using Trinity v2.0.6 software22. Assembled transcripts were searched for coding transcript by using transdecoder tool23. These assembled transcripts were further searched for the orf finding using transdecoder program and the completeness of the transcript. All the protein coding sequences were searched for further annotation using insect uniprot protein database with an e-value cutoff < 1e−10. Some differentially expressed uncharacterized genes were further identified by using Uniprot id and BLAST analysis. For further evaluation of the assembly and annotation completeness, BUSCO (Benchmarking Universal Single Copy Orthologs, version 5.4.3) analysis was performed by comparing with arthropod lineage in default settings (http://busco.ezlab.org/)./p> 200 bp in length and were annotated with UniProtKB insect data resulting in13,779 transcript annotations (Table 1). Out of the 13,779 annotated transcripts 6982 showed > 75% query coverage and these were used for further comparative transcriptome analysis of DEGs between CanDef-20 and EV fed H. armigera larvae. Of the 6982 genes, 47% were found to align with genus Heliothis and 6.19% aligned with genus Helicoverpa. Applying the criteria of log2FC ≥  ± 2 with P-value ≤ 0.05 and FDR ≤ 0.05 to the 13,779 transcripts resulted in detection of 2012 transcripts of which 56 transcripts were found upregulated and 529 were downregulated./p> 75% query coverage, 2327 (33.32%) genes were found to be downregulated and 659 (9.4%) genes were found to be upregulated upon CanDef-20 feeding. Additionally 1679 genes were found to be uniquely expressed in CanDef-20 fed larvae and 1545 genes were uniquely expressed in EV control fed larvae./p> 15 downregulated. LP1 and TLP are not characterized from H. armigera (Supplementary Table S2), though they showed homology with lipase-1 (NM_001043501.1) and triacylglycerol lipase (XM_038014482.1) respectively found in Bombyx mori. The third (LP2) upregulated lipase has homology with H. armigera triacyl glycerol lipases (XM_047184139.1)./p>